مشاركة المقالة. ميرا جنبا إلى جنب مع كاس 12A للكشف السريع عن أمراض الجهاز التنفسي لدى الأطفال.

التهابات الجهاز التنفسي الحادة هي أمراض الجهاز التنفسي الشائعة لدى الأطفال، وغالبا ما تكون ناتجة عن الفيروسات.الفيروس التناسلي التنفسي (RSV) والفيروس الأدينوفيروسي التنفسي (ADV) هما اثنان من مسببات الأمراض الشائعة التي تسبب الالتهابات الجهاز التنفسي الحادة لدى الأطفاليمكن أن تسبب الحالات الخفيفة أعراض البرد الشائع مثل السعال وتسرب الأنف، في حين يمكن أن تسبب الحالات الشديدة مضاعفات شديدة مثل الالتهاب الرئوي والتهاب الأذن.وفقاً لتوصيات منظمة الصحة العالمية، يجب أن يكون الكشف عن مسببات الأمراض سريعًا ودقيقًا وحساسًا ومحددًا ويجب ألا يعتمد على فنيين متخصصين أو أجهزة كبيرة.من المهم بشكل خاص تطوير طريقة للكشف عن RSV و ADV يمكنها تلبية متطلبات الكشف المذكورة أعلاه.

The research group of Director Ma Dongli of the Institute of Pediatrics of Shenzhen Children's Hospital published an article "A multiplex recombinase polymerase amplification assay combined with CRISPR/ Cas12a for the detection of respiratory syncytial virus and respiratory adenovirus" in the journal "Scientific Reports"، مع عامل تأثير 4.6.

نظرة عامة على البحث

يتم دمج تكنولوجيا تضخيم الأحماض النووية السريعة المتعددة الإنزيمات MIRA مع نظام الكشف عن CRISPR / Cas. من خلال تصميم بدائيات MIRA وCRISPR RNAs (crRNAs) ،أداء مقارنات تسلسل متعددة، وتحسين ظروف التفاعل، واستخدام أجهزة الكشف العددي للكشف عن الحساسية والخصوصية.
واستخدام نتائج QPCR كمراقبة مقارنة، تم دراسة اتساق نتائج الاختبار من 160 عينة مسح الحلق السريري.

نتائج التجربة

1حساسية وتفاصيل طريقة اكتشاف MIRA-CRISPR/Cas12a

في الكشف عن طريقة MIRA ، يستخدم زوج البرايمر RSV- F1 / R1 لتضخيم الأحماض النووية من عينات مسح الحلق من مرضى RSV ، ADV ، PIV ، RhV ، MP ، CP ، FluB ، hMPV ، FluA ، أو RSV / ADV المصابين معًا.باستثناء RSV و ADV، والتي كانت تحتوي على نطاقات مكثفة، كانت النتائج الأخرى سلبية، مما يشير إلى أن المبتكرات المختارة من MIRA لم تتفاعل مع المسببات المرضية الثمانية الأخرى التي تم اختبارها وكانت محفوظة بشكل جيد.
بعد ذلك، تم تخفيف البلازمتين المتجانسين لـ RSV و ADV 10 مرات باستخدام الماء المعقّم، وكانت حدود الكشف عن RSV و ADV⁶النسخ / مل.

(1-10: عينات مسحة الحلق من المرضى المصابين بالفيروس المزمن، والفيروس المزمن/الفيروس المزمن، وعينات من مسببات الأمراض الأخرى في الجهاز التنفسي على التوالي)

2. مقارنة مع qPCR

بالمقارنة مع طريقة qPCR ، فإن حدود الكشف عن RSV و ADV كلاهما 10³النسخ / مل.

(حساسية الكشف عن qPCR لـ RSV و ADV)

تعد طريقة MIRA-CRISPR أكثر ملاءمة للمختبرات الشعبية ، مع وقت اكتشاف قصير ، وتشغيل بسيط ، وعدم الحاجة إلى أدوات qPCR واسعة النطاق لإكمال العمليات التجريبية.

3مقارنة العينات السريرية

تم جمع عينات من مسح الحلق من 160 طفلاً مصابًا بالالتهابات التنفسية الحادة. في الوقت نفسه، تم استخدام طريقة MIRA-CRISPR وطريقة qPCR للكشف عنوقد قارنت النتائج مع نتائج التجارب السريرية.
بالمقارنة مع طريقة qPCR، كانت حساسية طريقة MIRA-CRISPR لفيروس RSV و ADV 98.1٪ و 91.4٪ على التوالي، وكانت خصائص الكشف 100٪. قيمة كابا أكبر من 0.95، مما يدل على درجة عالية من الاتساق.

طريقة MIRA-CRISPR لها مزايا الكشف السريع والحساس والمحدد عن RSV و ADV. يمكنها الكشف عن العدوى الفيروسية بسرعة ودقة،وهو أكثر ملاءمة للاستخدام في المناطق ذات الموارد الطبية النادرة.